Diversi enżimi komunement użati fl-esperimenti PCR

Reazzjoni tal-katina tal-polimerażi, imqassra bħalaPCRbl-Ingliż, hija teknika tal-bijoloġija molekulari użata biex tkabbar frammenti speċifiċi tad-DNA.Jista 'jitqies bħala replikazzjoni speċjali tad-DNA barra l-ġisem, li tista' żżid ħafna ammont żgħir ħafna ta 'DNA.Matul l-intierPCRproċess ta 'reazzjoni, klassi waħda ta' sustanzi għandha rwol vitali - enzimi.

1. Taq DNA

Fl-esperimenti fil-jiem bikrija taPCR, Ix-xjentisti użaw Escherichia coli DNA polymerase I, Iżda hemm problema b'din l-enzima: jeħtieġ li timla enzima ġdida kull darba li jitwettaq ċiklu, li jagħmel il-passi tal-operazzjoni kemmxejn ikkumplikati u huwa diffiċli li jiġu amplifikati kompletament awtomatikament.Din il-problema ġiet solvuta wara li x-xjentisti iżolaw aċċidentalment Taq DNA polymerase minn Thermus aquaticus fl-1988. Minn dakinhar, l-amplifikazzjoni awtomatika tad-DNA saret realtà.L-iskoperta ta 'din l-enzima tagħmel ukollPCRteknoloġija teknoloġija konvenjenti, prattika u universali.Bħalissa, Taq DNA polymerase hija l-aktar polimerażi komuni fil-kitts tad-DNA.

2. PfuDNA

Kif imsemmi hawn fuq, Taq DNase għandu bug kbir, għalhekk ix-xjenzati mmodifikaw Taq DNA polymerase sa ċertu punt sabiex jevitaw amplifikazzjoni mhux speċifika minħabba nuqqas ta 'tqabbil, li jirriżulta f'riżultati tat-test mhux preċiżi.Iżda l-modifika ta 'Taq DNA polymerase tista' tinibixxi l-attività tad-DNA polymerase f'temperatura tal-kamra.PfuDNA polymerase tista 'tpatti tajjeb għall-iżvantaġġi ta' hawn fuq ta 'Taq DNA polymerase, sabiex ir-reazzjoni tal-PCR tkun tista' titwettaq b'mod normali, u r-rata ta 'suċċess tal-amplifikazzjoni tal-ġene fil-mira tista' tittejjeb b'mod effettiv.

3. Reverse Transcriptase

Reverse transcriptase ġiet skoperta fl-1970. Din l-enzima tuża RNA bħala mudell, dNTP bħala sottostrat, issegwi l-prinċipju ta 'parir tal-bażi, u tisintetizza linja waħda tad-DNA kumplimentari għall-mudell RNA fid-direzzjoni 5'-3'.Reverse transcriptase hija primarjament dipendenti fuq l-attività tad-DNA polymerase minn DNA jew RNA templates u għalhekk m'għandha l-ebda attività 3′-5′ exonuclease.Madankollu, għandu attività RNase H, li tillimita t-tul tas-sintesi tar-reverse transcriptase sa ċertu punt.Minħabba l-fedeltà baxxa u t-termostabbiltà tat-transcriptase reverse selvaġġa, ix-xjentisti mmodifikawha wkoll.

GħalPCResperimenti, il-konsumabbli ewlenin huma: tubu PCR individwali, tubu PCR 4/8-istrixxa, pjanċi PCR.

Ta’ LabioOġġetti tal-konsum tal-PCRgħandhom dan li ġejvantaġġi:

Pjanċi PCR: Kompatibilità wiesgħa taċ-ċiklatur termali;Kuntrast għoli, identifikazzjoni tajba faċli;riflessjoni fluworexxenza sew; tajbatrasferiment tas-sħana;DNase, RNase, DNA, inibituri tal-PCR iċċertifikati, u ttestjati mingħajr piroġeni.

Tubi PCR individwali: Reżistenti għall-evaporazzjoni; tajbatrasferiment tas-sħana;Ċarezza ottika eċċellenti;DNase, RNase, DNA, inibituri tal-PCR iċċertifikati, u ttestjati mingħajr piroġenu.

Tubi PCR 4/8-strips: Ħitan ultra-rqaq; ċarezza għolja; riflessjoni tajba tal-fluworexxenza;jista 'juża fl-industrija farmaċewtika, l-industrija tal-ikel u l-bijoloġija molekulari; materjal PP verġni ta' kwalità għolja; DNase, RNase, DNA, inibituri tal-PCR iċċertifikati u ttestjati mingħajr piroġenu.